ABSTRACT
RESUMEN La violencia sexual es un problema mundial, y representa un delito grave que frecuentemente es difícil imputar, ante la ausencia de testigos. La valoración de las muestras de semen enviadas al laboratorio, para la detección de espermatozoides, es de gran importancia para encontrar al agresor; sin embargo, la evidencia no es sencilla, por la presencia de otros organismos y la labilidad espermática. El objetivo del presente estudio fue identificar espermatozoides humanos en muestras contaminadas con levaduras. Se aplicaron diferentes técnicas y recursos microscópicos. Se seleccionaron 46 muestras de semen fresco. Se dividieron en dos grupos: G1 normo u oligozoos-pérmicas (n = 28) y G2 azoospérmicas (n = 18). Cada muestra se diluyó 1:1 con solución fisiológica y se agregaron 0.05 mL de suspensión de levaduras Candida albicans. Como control, se procesaron testigos puros de espermatozoides (CE) y levaduras (CL). Las muestras se analizaron con microscopio óptico (MO), contraste de fase (CF), de luz polarizada (LP) y microscopio fluorescente (MF) con diferentes técnicas de tinción. El tinte Papanicolaou mostró mayor eficiencia que el tinte hematoxilina verde brillante (P < 0.05) para identificar espermatozoides con microscopio óptico. La detección de elementos refringentes mostró mayor correlación con la presencia de espermatozoides (CF: r = 0.966; P < 0.001), que la presencia de elementos birrefringentes (LP: r = 0.737; P < 0.001) y elementos fluorescentes (MF: r = 0.487; P < 0.05). La microscopía confocal con tinción de blanco de calcofluor-azul de Evans y naranja de acridina permitió la identificación de contaminación por levaduras. El empleo de técnicas microscópicas auxiliadas con técnicas de tinción permite confirmar la presencia de espermato zoides enteros o fragmentados en muestras de semen contaminadas con levaduras.
ABSTRACT Sexual violence is a global problem, and represents a serious felony which is often difficult to impute due to the absence of witnesses. The evaluation of semen samples sent to the laboratory, for the detection of spermatozoa is of great importance to find the aggressor. However the evidence is not simple due to the presence of other organisms and sperm lability. The objective of the present study was to identify human spermatozoa in samples contaminated with yeast. Different techniques and microscopic resources were applied and 46 samples of fresh semen were selected. They were divided into two groups: G1 normo or oligozoos-perms (n = 28) and G2 azoosperms (n = 18). Each sample was diluted 1:1 with physiological solution and 0.05 mL of yeast suspension Candida albicans was added. As controls, pure sperm (CE) and pure yeast (CL) were processed. The samples were analyzed with optical microscopy (MO), phase contrast (CF), polarized light (LP) and fluorescent microscope (MF) with different staining techniques. Papanicolaou dye showed greater efficiency than bright hematoxylin-green dye (P < 0.01) to identify spermatozoa with an optical microscope. The presence of refringent elements showed a higher correlation with the presence of spermatozoa (LP: r = 0.966; P < 0.001), that the presence of birrefringent elements (LP: r = 0.737; P < 0.001) and fluorescent elements (MF: r = 0.487, P < 0.05). Confocal microscopy with Evans blue calco-fluor white stain and acridine orange allowed the identification of yeast contamination. The use of microscopic techniques aided by staining techniques confirms the presence of whole or fragmented spermatozoa in semen samples contaminated with yeasts.
ABSTRACT
Utilizando bases de datos Medline, Science Direct, Endocrine Society y Sociedad Argentina de Andrología se realizó una revisión bibliográfica para estudiar e interpretar el efecto del estrés oxidativo (EO) en el proceso reproductivo. Los seres vivos que utilizan oxígeno para obtener energía son liberadores de especies reactivas de oxígeno (ERO). Existen situaciones andrológicas, factores medioambientales y compuestos químicos que incrementan las citoquinas proinflamatorias, generan EO alterando la regulación del proceso espermatogénico. Los espermatozoides son susceptibles al daño oxidativo, debido al elevado contenido de ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) en su membrana y el escaso citoplasma que limita el contenido de enzimas antioxidantes. El EO induce daño peroxidativo en la membrana espermática y fragmentación del ADN en los genomas nucleares y mitocondriales. El test estrés espermático modificado (MOST) estima la resistencia espermática a la lipoperoxidación. El incremento de ERO en hombres con trastornos reproductivos y su correlación con alteraciones seminales revelan la importancia de la evaluación del EO en el estudio integral del hombre que consulta por infertilidad.
Data from Medline, Science Direct, Endocrine Society and organisms of information of Argentina Society of Andrology were used to study and interpret the effect of oxidative stress (OS) in the reproductive process. The living things use the oxygen for energy they release reactive oxygen species (ROS). There andrology situations enviromental factors, chemical agents that increase of proinflammatory cytokines, OS generated by altering the regulation of spermatogenesis process. The spermatozoids due to high concentration of polyunsaturated fatty acids (PFA) in its membrane are sensitive to the oxidative damage induced for ROS and it also contain low levels of antioxidant enzymes for their limited cytoplasm. OS induced peroxidative damage in sperm membrane and DNA fragmentation in the nuclear and mitochondrial genomes. The modified sperm stress test (MOST) estimates sperm resistance to lipoperoxidation. The ROS increased in men with reproductive disorders and its correlation with seminal alterations reveal the importance of the evaluation of OS in the study of man consulting for infertility.
ABSTRACT
Se relacionó la exposición ocupacional a agroquímicos con parámetros seminales vinculados con la espermatogénesis. En 104 muestras seminales de pacientes con infertilidad idiopática y 20 a 45 años de edad del Servicio de Reproducción Hospital Centenario (Rosario, Argentina), se efectuó espermograma y estudios funcionales según normas OMS (1999). Se agruparon en G1 (n=42) trabajadores expuestos a agroquímicos y G2 (n=62) hombres sin riesgo espermatogénico. La concentración espermática se determinó en cámara de Neubauer, con Papanicolaou se evaluó la concentración de células germinales y la morfología espermática. Se observó en concentración espermática (espermatozoides.10(6)/ml) G1: 21,1±7,1; G2: 41,6±9,2; morfología ( por ciento espermatozoides normales) G1: 5,2±1,3; G2: 8,2±3,6 y células germinales.10(6)/ml en G1: 0,91±0,51; G2: 0,32±0,21. La concentración espermática fue menor en G1, las alteraciones morfológicas y células germinales mayores en G1. Estos resultados indican que la exposición a agroquímicos altera la espermatogénesis y es un factor a considerar cuando se estudia infertilidad masculina.
The occupational exposition to agrochemicals was related with sperm parameters linked with spermatogenesis. In 104 semen samples of patients with idiopatic infertility of the Reproduction Service of Centenario Hospital (Rosario, Argentina), sperm study and functional tests according to WHO (1999) have been carried out. Two groups were formed: G1 (n=42) workers exposed to agrochemicals; G2 (n=62) men with no spermatogenic risk. The sperm concentration was determined in Neubauer camera, the concentration of germinal cells and the sperm morphology were evaluated with Papanicolaou. The results were: sperm concentration (spermatozoids 10(6)/ml) G1: 21.1 ± 7.1; G2: 41.6 ± 9.2; morphology ( percent normal spermatozoids) G1: 5.2 ± 1.3; G2: 8.2 ± 3.6; and germinal cells 10(6)/ml in G1: 0.91 ± 0.51; G2: 0.32 ± 0.21. The sperm concentration was lower in G1, major morphological changes and germinal cells in G1. This results show that the exposition to agrochemicals alters the spermatogenesis, it is a factor to consider in the male infertility.